doi: 10.15389/agrobiology.2017.4.795rus
УДК 636.1:591.111.1:57.043
ОПТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НЕЙТРОФИЛОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ
КРОВИ ЛОШАДЕЙ ПРИ ОБЩЕМ ВНЕШНЕМ ВОЗДЕЙСТВИИ
γ-ИЗЛУЧЕНИЯ
Т.С. ШЕВЧЕНКО
Важным диагностическим тестом для оценки состояния здоровья и выявления заболеваний сельскохозяйственных животных считается определение содержания форменных элементов крови, включая нейтрофилы. Качественные и количественные характеристики нейтрофилов имеют важное значение для оценки состояния здоровья и при лучевом поражении животных в связи с радиационно-индуцированной гибелью предшественников гранулоцитов в костном мозге. Следует отметить весьма немногочисленное число публикаций, посвященных изучению состояния нейтрофилов при радиационных воздействиях не только у сельскохозяйственных, но и у лабораторных животных. В частности, в литературе практически отсутствуют данные об оптических свойствах нейтрофилов и о влиянии на них радиационного фактора. Поэтому целью работы стало исследование оптических свойств этих клеток, выделенных из периферической крови лошадей, которых подвергли общему внешнему воздействию γ-излучения. Определяли величину оптической плотности суспензии нейтрофилов при λ = 600 нм и длине оптического пути 1 см. Кровь у животных отбирали из яремной вены до облучения и на 1-е, 3-и, 5-е, 7-е, 10-е, 15-е, 20-е, 25-е и 30-е сут после облучения. Суспензию нейтрофилов выделяли из периферической крови лошадей при центрифугировании в градиенте плотности урографина с d = 1,077 г/см3. Контролем служила группа из 4 лошадей, которых содержали в тех же условиях, что и 4 группы подопытных животных по 5 гол. в каждой. Подопытные группы подвергали общему внешнему воздействию γ-излучения в дозах 2, 3, 4 и 5 Гр. Было обнаружено, что величина оптической плотности суспензии нейтрофилов в расчете на 105 кл/мл, составляющая в среднем 0,572±0,023 отн. ед., практически не претерпевает изменений при облучении лошадей в исследуемом диапазоне доз. Это свидетельствует о постоянстве оптических свойств нейтрофильных гранулоцитов при радиационном поражении животных, что позволяет проводить фотометрические исследования этих клеток у облученных лошадей. Фотометрический анализ выделенных нейтрофилов выявил следующие закономерности. Величина оптической плотности аликвоты суспензии клеток у необлученных лошадей составила 0,235±0,032 отн. ед. В начальный период лучевой патологии у всех групп облученных животных величина оптической плотности нейтрофилов возрастала в 2,1-2,8 раза, затем последовательно уменьшалась и увеличивалась в латентный период на 5-10-е сут, далее резко снижалась (в 10-12 раз) в период разгара на 20-30-е сут. У лошадей, подвергнутых воздействию γ-излучения в дозе 5 Гр, наблюдали значительное уменьшение показателя (в 18 раз) на 10-е сут. Проведенные исследования показали, что внешнее воздействие γ-излучения в широком диапазоне доз приводит к изменению величины оптической плотности суспензии выделенных нейтрофилов, которое согласуется с динамикой их содержания в периферической крови лошадей.
Ключевые слова: лошади, общее внешнее воздействие g-излучения, периферическая кровь, нейтрофилы, оптическая плотность, содержание нейтрофилов.
T.S. Shevchenkо
An important diagnostic test to reveal diseases in agricultural animals is to define the content of formed elements, including neutrophils. Qualitative and quantitative neutrophil characteristics are essential in health assessment and in case of radiation damage of animals due to the radiation induced death of granulocyte progenitors in the bone marrow. Worth noting is a small number of publications on the state of neutrophils in exposed animals, not only in agricultural but also in the laboratory ones. In particular, the literature practically lacks data on the optical properties of neutrophils and the effects on them of the radiation factor. Therefore, the aim of the paper was to study the optical properties of these cells isolated from the peripheral blood of horses exposed to total external γ-radiation. The absorbancy of horse neutrophil suspension was determined on a spectrophotometer СF-26 (Russia) at 600 nm and optical path length of 1 cm. The animal blood was taken from the jugular vein prior to irradiation and then on days 1, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 25 and 30 after irradiation. The neutrophil suspension was obtained from the peripheral blood by urografin density gradient centrifugation with a specific density of 1.077 g/cm3. A group of four horses served as control, these were kept in the same conditions as 4 groups of experimental animals, 5 horses each. The latter were exposed to total external γ-radiation at doses of 2, 3, 4 and 5 Gy. The value of the optical density of neutrophil suspension calculated for 105 cells per 1 ml, which averages 0.572±0.023 relative units, was found to be practically unchangeable in horses exposed to external γ-radiation in a wide dose range. This is the evidence of stability of the optical properties of neutrophil granulocytes in animals with a radiation damage, which allows photometric investigations of these cells in irradiated horses. The photometric analysis of the suspension of the isolated neutrophils has revealed the following regularities. The optical density of cells in intact horses was 0.235+0.032 relative units. In the early period of radiation pathology in all groups of the treated animals the value of the neutrophil optical density increased 2.1-2.8 times, then sequentially decreased and increased in the latent period on days 5-10 and fell drastically (up to 10-12 times) in the main phase of radiation sickness on days 20-30. The horses exposed to γ-radiation at 5 Gy showed noticeable reduction in the parameter (18 times lower) on day 10. The investigations have shown that total exposure to γ-radiation in a wide dose range results in changes of optical properties of suspension of the isolated neutrophils which is consistent with the dynamics of the neutrophil content in the peripheral blood of horses.
Keywords: horses, total external exposure to γ-radiation, peripheral blood, neutrophills, optical density, neutrophil content.
ФГБНУ Всероссийский НИИ радиологии |
Поступила в редакцию |
