doi: 10.15389/agrobiology.2016.4.467rus

УДК 636/639:636.4:578:577.083

 

ИНФЕКЦИОННАЯ АКТИВНОСТЬ ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ
СВИНЕЙ В ЛАБОРАТОРНЫХ ОБРАЗЦАХ И ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ
ПРИ РАЗНЫХ ТЕМПЕРАТУРНЫХ РЕЖИМАХ (С ЭКСТРАПОЛЯЦИЕЙ
НА СОХРАНЯЕМОСТЬ В ПРИРОДНЫХ УСЛОВИЯХ)

И.П. СИНДРЯКОВА1, Ю.П. МОРГУНОВ1, А.Ю. ЧИЧИКИН1,
И.Х. ГАЗАЕВ2,  Д.А. КУДРЯШОВ1, С.Ж. ЦЫБАНОВ1

Известно, что вирус африканской чумы свиней (АЧС) может распространяться алиментарно (например, вследствие скармливания животным контаминированных вирусом пищевых и боенских отходов, не подвергнутых термической обработке, комбикормов, не прошедших ветеринарно-санитарную экспертизу и поступивших из неблагополучных районов, и т.п.). Свинина служит сырьем для приготовления солонины, мясных консервов, сала и других пищевых продуктов. Сохраняемость вируса в них окончательно не изучена. Нами впервые выполнены исследования инфекционной активности изолята вируса АЧС, циркулирующего на территории Российской Федерации, в контаминированной продукции свиноводства, кормах, а также в пробах, предназначенных для ветеринарно-санитарного надзора. С этой целью мы экспериментально заражали 3-4-месячных подсвинков с живой массой 20-30 кг, вводя внутримышечно вирусосодержащую кровь. Животных инокулировали изолятом Волгоград-Калач 2012 с исходным инфекционным титром 7,5 lg ГАЕ50/см3(получен из Государственной коллекции ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии). Через 3 сут после заражения проводили убой, отбирали пробы органов и тканей для выявления вируса, а из мяса изготавливали солонину, мясные консервы и шпик. Кровь, содержащую вирус АЧС, использовали также для искусственной контаминации образцов кормов и питьевой воды. Для изучения влияния температуры хранения образцов на инфекционную активность вируса и на возможность обнаружения фрагментов его генома приготовленные образцы распределили по аликвотам для дальнейшего хранения при различных температурных режимах: 20-25 °С (комнатная температура); 4-6 °С (условия бытового холодильника); -16…-20 °С (температура морозильной камеры). Температуры, выбранные для хранения образцов, соответствовали естественным погодным условиям в разные времена года (20-25 °С летом, -16…-20 °С зимой); температура 4-6 °С, как правило, поддерживается в тамбуре свинарника или кормокухне в зимние месяцы. Через каждые 5 сут отбирали пробы для определения титра вируса АЧС в образцах и выявления его генома. Выделение вируса проводили в первичной культуре клеток костного мозга свиньи в течение 5 сут в двух последовательных пассажах. Результаты учитывали по гемадсорбирующим свойствам вируса (РГАд) и в ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ). Установлено, что вирус АЧС обнаруживается в солонине и шпике, хранившихся при 20-25 °С в течение 16 сут. При температуре хранения 4-6 °С вирус в солонине выявляли в течение срока наблюдения (60 сут). В образцах, хранившихся при отрицательных температурах, вирус АЧС сохранял инфекционную активность на протяжении всего периода исследований (60 сут) и были найдены фрагменты его ДНК. Таким образом, в пробах органов и пищевых продуктах, полученных от свиней убитых в ранние сроки после заражения, инфекционный вирус АЧС сохраняется (в зависимости от условий хранения) длительное время и может представлять серьезную опасность как фактор распространения возбудителя. Полученные данные также позволяют прогнозировать температурные условия, способствующие поддержанию циркуляции вируса в очагах АЧС.

Ключевые слова: африканская чума свиней, АЧС, вирус, реакция гемадсорбции, РГАд, полимеразная цепная реакция в режиме реального времени, ПЦР-РВ, эпизоотия, ликвидация очага АЧС.

 

Полный текст

 

THE INFLUENCE OF TEMPERATURE ON THE RUSSIAN ISOLATE OF
AFRICAN SWINE FEVER VIRUS IN PORK PRODUCTS AND
FEED WITH EXTRAPOLATION TO NATURAL CONDITIONS

I.P. Sindryakova1, Yu.P. Morgunov1, A.Yu. Chichikin1, I.Kh. Gazaev2,
D.A. Kudryashov1, S.Zh. Tsybanov1

It is known that one of the ways to spread African swine fever (ASF) virus is alimentary way (e.g., through feeding animals with contaminated feed and slaughterhouse waste products not subjected to thermal treatment, not passed veterinary and sanitary examination, and derived from epidemiologically disadvantaged regions). A variety of preserved food, such as corned beef, canned meat, bacon, etc., is made of pork products and by-products. Persistence of the virus in these products is not fully understood. For the first time we carried out studies on infectious activity of ASF virus isolates circulating in the Russian Federation, in contaminated pig products, feed, as well as in samples intended for veterinary-sanitary supervision. For this purpose, the 3-4 month-old piglets of 20-30 kg body weight were intramuscularly challenged with virus-containing blood. For inoculation we used ASFV isolate Volgograd-Kalach 2012 with the initial infectious titer of 7.5 lg HAU50/cm3 obtained from the National Collection of the SSINRRIVV&M of RAAS. Three days after infection the animals were slaughtered, samples of internal organs and tissues were taken for virus isolation, and the pork was used for making corned beef, canned meat and salted lard. Blood, containing ASF virus, was also used for contamination of a compound feed and drinking water. To study effects of storage temperature on the virus infectious activity and genome detection, the samples were divided into aliquots and stored at 20-25 °С (room temperature), 4-6 °С (a common refrigerator); -16…-20 °С (freezer). The temperatures selected for the storage of samples conform to the natural weather conditions at various seasons (20-25 °С in the summer, -16…-20 °С in winter); 4-6 °С is generally maintained in storerooms or stern room in the winter months. Samples from the aliquots were taken with a 5 day intervals to determine the ASF virus titer and its genome fragments. Virus isolation was carried out in a primary culture of swine bone marrow cells for 5 days in two consecutive passages. Hemadsorption test (HAD) and real-time PCR were conducted for ASFV titer estimation and genome detection. As a result, the ASF virus was found in corned beef and lard stored at 20-25 °С for 16 days. At storage temperature of 4-6 °С the ASF virus was revealed in corned beef during the observation period (60 days). In frozen samples the ASFV infectious activity and DNA fragments were found throughout the entire study period (60 days). Thus, it is found that in food products and by-products from pigs slaughtered soon after ASF infecting the ASFV infectivity persists for a long time depending on the storage conditions and can pose a serious danger as a pathogen transmission factor. The data also allow to predict the temperature conditions conducive to maintaining circulation of the virus in АSF outbreaks.

Keywords: African swine fever, ASF, virus, hemadsorption test (HAD), real-time polymerase chain reaction (qPCR), epizooty, liquidation of infection focus.

 

1ГНУ Всероссийский НИИ ветеринарной
вирусологии и микробиологии,

601125 Россия, Владимирская обл., Петушинский
р-н, пос. Вольгинский, ул. Академика Бакулова, стр. 1,
е-mail: sindryakova.irina@yandex.ru;
2ФГБУ Кабардино-Балкарский референтный центр Россельхознадзора,
360051 Россия, Кабардино-Балкарская Республика,
г. Нальчик, ул. 9 Мая, 1

Поступила
в редакцию
17 мая 2016 года

 

Оформление электронного оттиска

назад в начало