БИОЛОГИЯ РАСТЕНИЙ

БИОЛОГИЯ ЖИВОТНЫХ

ПЕЧАТНАЯ ВЕРСИЯ

ЭЛЕКТРОННАЯ ВЕРСИЯ

КАРТА САЙТА

НА ГЛАВНУЮ

Сельскохозяйственная биология, 2009, № 2, с. 104-110.

УДК 636.2:57.083.3:591.11

ИММУНОРЕАКТИВНОСТЬ У ТЕЛОЧЕК ПРИ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА НА ФОНЕ ПОДКОЖНОГО ВВЕДЕНИЯ СУКЦИНАТА ХИТОЗАНА

Д.В. ИВАНОВ¹, Е.В. КРАПИВИНА¹, Ю.Н. ФЕДОРОВ², А.И. АЛБУЛОВ²

На телочках черно-пестрой породы оценивали иммунологическую реактивность (по клеточным и гуморальным факторам) в зависимости от срока введения сукцината хитозана при вакцинации животных против лептоспироза. Установлено, что наиболее выраженный иммунный ответ наблюдался при инъекции препарата за 3 сут до вакцинации.

Ключевые слова: иммунный статус, вакцинация, лимфоциты, иммуноглобулины, антитела, сукцинат хитозана, телочки.

 

В системе профилактики инфекционных болезней животных основная роль отводится вакцинации (1), однако адекватный ответ на введение антигенов возможен при физиологически полноценном функционировании иммунной системы, кроме того, характер иммунного ответа зависит от природы антигена. Взаимодействие иммунокомпетентных клеток с антигеном находится под генетическим контролем, при этом у животных иммунореактивность варьирует (вплоть до состояния ареактивности) (2, 3).

Для иммунокоррекции в настоящее время широко используются   препараты различной природы (4). В частности, стимулирующее действие препаратов хитозана на иммунную систему показано в опытах на свиньях при внутримышечной инъекции за 1-2 сут до вакцинации и при одновременном введении с антигеном  (5, 6).

Целью нашей работы было изучение иммунологической реактивности у телочек при инъекции сукцината хитозана в разные сроки при вакцинации против лептоспироза.

Методика. Эксперимент проводили в учхозе «Кокино» (Брянская государственная сельскохозяйственная академия), где по принципу аналогов было сформировано четыре группы 4,5-месячных телочек черно-пестрой породы (средняя живая масса — 115,00±2,54 кг) по 6 гол. в каждой: I группа — контроль, II, III и IV — опыт. Телочек во всех группах иммунизировали поливалентной вакциной ВГНКИ против лептоспироза животных серогрупп grippotyphosa, pomona, tarassovi, sejroe согласно наставлению по применению. Животным во II, III и IV группах подкожно в верхнюю треть шеи дополнительно инъецировали водный раствор низкомолекулярного сукцината хитозана в дозе 300 мг/гол. (~ 2,6 мг/кг живой массы) соответственно за 3 сут до вакцинации, одновременно с вакцинацией и через 3 сут после нее. Условия содержания подопытных телочек отвечали ветеринарно-зоогигиеническим требованиям, рационы, составленные с учетом живой массы, были сбалансированы по всем нутриентам согласно нормам кормления животных (7). Перед вакцинацией, а также через 1 и 2 мес после вакцинации у телочек утром до кормления брали из яремной вены пробы крови для анализа и выполняли индивидуальное взвешивание животных.

Число лейкоцитов в крови подсчитывали в камере Горяева, для определения лейкограммы использовали мазки, окрашенные по Романовскому-Гимза. Долю Т-лимфоцитов (Е-РОЛ, %) оценивали в реакции розеткообразования с эритроцитами барана, В-лимфоцитов (М-РОЛ, %) — с эритроцитами мыши (8), численность субпопуляции иммунорегуляторных Т-лимфо-цитов, обладающих преимущественно хелперной/индукторной (Е-РОЛтр., %) и супрессорной/киллерной (Е-РОЛтч., %) активностью, — в тесте с теофиллином (9), содержание иммуноглобулинов — по Манчини (10). Количество общего белка измеряли рефрактометрически, белковых фракций — нефелометрическим методом (11). Содержание специфических антител к лептоспирам различных серовариантов выявляли в реакции микроагглютинации. Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики. Для выявления статистически значимых различий использовали критерий Стьюдента-Фишера по Н.А. Плохинскому (12). В качестве значений физиологической нормы принимали соответствующие показатели, приведенные в литературе (13-16).

Результаты. Число лейкоцитов в крови у телочек из I, II и III групп перед началом опыта существенно не различалось и находилось в пределах нормативных значений, из IV — было достоверно больше, чем в I-III группах — соответственно на 44,39; 47,23 и 44,89 % и превышало значения физиологической нормы (табл. 1). Введение сукцината хитозана не оказало существенного влияния на содержание лейкоцитов в крови у животных в поствакцинальный период.

Содержание лимфоцитов в крови у животных всех групп перед началом опыта существенно не различалось и соответствовало наиболее высоким нормативным значениям (у телочек из IV группы) или несколько превышало их (у животных из I, II и III групп). Через 1 мес после вакцинации у особей из II и IV групп этот показатель оставался в пределах нормы и был ниже контроля соответственно на 19,80 и 11,98 % (Р < 0,05), через 2 мес во всех группах — превышал нормативные значения (без достоверно значимых различий между животными), что указывает на развитие реакции переактивации адаптационного синдрома организма (17).

Содержание Т-лимфоцитов в крови у подопытных телочек перед началом опыта существенно не различалось и было ниже нормы. Через 1 мес после вакцинации у животных из II и III групп установили повышение числа Т-лимфоцитов в крови по сравнению с контролем соответственно на 83,35 и 74,47 % (Р < 0,05), из IV — его снижение по сравнению с показателем у телочек из II группы на 46,12 % (Р < 0,05). Через 2 мес после вакцинации отмечалась тенденция к росту содержания Т-лимфоцитов в крови животных из II, III и IV групп по сравнению с контролем (соответственно на 31,54; 30,88 и 31,79 %).

Содержание теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов (фракция, обогащенная хелперами/индукторами) у животных всех групп перед началом опыта была выше по сравнению с показателем для общей популяции Т-лимфоцитов, что указывает на инверсный эффект теофиллина и, следовательно, на наличие малодифференцированных Т-лимфоцитов этой фракции. Через 1 мес после вакцинации наименьшее содержание теофиллинрезистентных Т-лимофитов установили у телочек из IV группы: ниже соответственно на 47,06 и 43,12 % (Р < 0,05), чем у животных из I и II групп, и на 27,27 % (Р > 0,05) — из III; через 2 мес у животных из II группы оно повысилось по сравнению с контролем на 30,59 % (Р < 0,05).

Доля малодифференцированных теофиллинрезистентных Т-лимфо-цитов (на которых рецепторы к эритроцитам барана проявились только после обработки теофиллином) перед началом опыта во всех группах была достаточно высокой, вероятно, в связи с тем, что у 4,5-месячных телочек иммунная система сформировалась не полностью. Наибольший показатель

имели животные из IV группы: выше, чем у телочек из I, II и III группы соответственно на 136,07; 121,74 и 51,86 % (Р < 0,05). В этот период только у одной особи (из II группы) зафиксировали незначительную долю теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов (фракция, обогащенная супрессорами/киллерами). Через 1 мес после вакцинации из шести телочек I группы только у одной обнаружили 3,5 % (0,22x109/л) малодифференцированных теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов, у животных из II и III групп эти клетки не выявлялись, в IV группе они имелись у трех телочек из шести, что указывает на более высокую степень дифференцировки Т-лимфоцитов у животных из II и III групп. Через 2 мес после вакцинации в контроле (I группа) отмечали снижение числа малодифференцированных теофиллинрезистентных Т-лим-фоцитов по сравнению с предыдущим периодом на 86,16 % (Р > 0,05), у телочек во II и III группах — появление их незначительного числа, в IV — его увеличение на 446,58 % (Р > 0,05).

Содержание теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов в крови через 1 мес после вакцинации имело тенденцию к повышению по сравнению с начальным периодом с наиболее высокими значениями у животных из II и III групп (превышение контроля соответственно на 1255,17 и 1758,62 %, Р < 0,05), что может свидетельствовать как о снижении активности антителогенеза, так и о появлении Т-лимфоцитов-киллеров. При этом содержание теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов у телочек из II-IV групп не достигало нормативных значений. Через 2 мес содержание этих клеток в крови у животных подопытных групп не имело достоверных различий.

Число В-лимфоцитов в крови у всех животных перед началом опыта было сходным и не достигало нормы. Через 1 мес после вакцинации у телочек из контрольной группы наблюдали тенденцию к его повышению (на 100,66 %), из II, III и IV групп — достоверно значимый рост (соответственно на 197,58; 280,47 и 90,96 %) по сравнению с начальным периодом. При этом доля В-лимфоцитов в крови у животных из III группы была ниже, чем у особей из II группы на 28,05 % (Р < 0,05), из IV — ниже, чем у телочек из I, II и III групп соответственно на 62,79; 56,65 и 39,75 % (Р < 0,05). Через 2 мес этот показатель у всех телочек существенно не различался.

Анализ показал (табл. 2), что перед началом опыта содержание IgG в сыворотке крови у животных было примерно одинаковым и соответствовало возрастным нормам, через 1 мес после вакцинации у животных из контрольной группы оно практически не изменялось, из II, III и IV — имело тенденцию к повышению по сравнению с начальным периодом соответственно на 9,23; 21,08 и 28,89 %; через 2 мес у особей из I и II групп — практически не изменялось, из III и IV — проявило тенденцию к снижению соответственно на 13,34 и 14,06 % по сравнению с предыдущим сроком исследования. Количество IgM в сыворотке крови перед началом опыта также существенно не различалось и соответствовало нормативным значениям. Через 1 мес наблюдали тенденцию к повышению этого показателя у особей из I группы — на 12,1, II — на 38,1, III — на 60,0  и IV — на 18,38 % по сравнению с началом опыта. Через 2 мес после вакцинации у животных из I и II групп отмечалась тенденция к дальнейшему повышению содержания IgM (соответственно на 22,54 и 1,29 %), из III и IV — напротив, к снижению (соответственно на 5,21 и 14,16 %) по сравнению с предыдущим периодом исследования. При этом у телочек в IV группе оно было достоверно ниже, чем в III (на 31,14 %). Концентрация IgA в сыворотке крови перед началом опыта тоже существенно не различалась и соответствовала минимальным значениям физиологической нормы. Через 1 мес после вакцинации у животных в контроле выявили тенденцию к снижению показателя на 8,33 %, во II, III и IV группах — к его повышению соответственно на 37,50; 24,24 и 2,50 % по сравнению с начальным периодом, причем во II и IV группе он был достоверно выше (на 33,33 и 24,24 %), чем в контроле. Через 2 мес у телочек в I группе отмечали тенденцию к повышению концентрации IgA на 9,09 %, во II, III и IV — к понижению соответственно на 6,82; 26,83 и 12,20 % по сравнению с предыдущим сроком. При этом содержание IgA в сыворотке крови у животных в III группе было на 26,83 % ниже (Р < 0,05), чем во II.

Содержание общего белка в сыворотке крови (см. табл. 2) у животных во всех группах перед началом опыта, через 1 и 2 мес после вакцинации соответствовало наиболее низким значениям физиологической нормы. При этом до вакцинации этот показатель по группам существенно не различался, а в последующие периоды был достоверно выше у телочек из IV группы по сравнению с контролем (на 9,75 % — через 1 мес, на 4,50 % — через 2 мес после вакцинации).

Содержание альбуминов в сыворотке крови у всех животных во все периоды исследования существенно не различалось и соответствовало норме. В то же время через 1 мес после вакцинации отмечалась тенденция к снижению этого показателя у особей в I и III группах соответственно на 1,03 и 6,50 % и достоверно значимое уменьшение — во II и IV группах соответственно на 15,13 и 14,72 % по сравнению с начальным периодом. Через 2 мес у животных во всех группах наблюдали тенденцию к росту числа альбуминов.

Содержание α-глобулинов в сыворотке крови у всех животных в исследованные периоды существенно не различалось и было ниже нормативных значений, что свидетельствует о гепатоцеллюлярной недостаточности. При этом у животных в IV группе через 1 мес после вакцинации происходило увеличение указанного показателя на 32,30 % (Р < 0,05) по сравнению с начальным периодом (что свидетельствует о тенденции к его оптимизации), однако через 2 мес он снижался (на 24,33 %, Р < 0,05) по сравнению с предыдущим периодом. Содержание b-глобулинов в сыворотке крови у животных во всех группах было выше нормативных значений, и у телочек в I, II и IV группах существенно не различалось, а у особей в III — превышало эти показатели соответственно на 32,47; 28,88 (Р < 0,05) и 17,04 % (Р > 0,05). Через 1 мес регистрировали значительное снижение содержания β-глобулинов у животных в I, II, III и IV группах соответственно на 35,01; 29,48; 35,76 и 34,04 % (Р < 0,05) по сравнению с начальным периодом. Достоверно более высокое количество белков этой фракции у особей из IV группы по сравнению с контролем, видимо, обусловлено их повышенным содержанием перед началом опыта. Через 2 мес концентрация β-глобулинов возрастала у телочек во всех группах: в I и II — соответственно на 59,45 и 54,97 % (Р < 0,05), в III и IV — на 28,10 и 24,14 % (Р > 0,05), причем у особей в IV группе показатель был достоверно ниже, чем во II (на 17,50 %), что указывает на менее выраженную диспротеинемию у животных IV группы. Содержание γ-глобулинов соответствовало наименьшим значениям физиологической нормы, особенно у животных в III (соответственно на 63,46 и 64,24 % ниже, чем в I и II) и IV группах (соответственно на 63,45 и 64,24 % ниже, чем в I и II). Через 1 мес доля белков этой фракции закономерно возрастала (Р < 0,05) у телочек в I, II, III и IV группах (соответственно на 72,02; 110,46; 222,13 и 316,80 %), через 2 мес — снижалась соответственно на 49,00; 48,58 (Р < 0,05); 32,55 (Р > 0,05) и 33,65 % (Р < 0,05). При этом у животных во II группе показатель был значительно выше (на 29,10 %, Р < 0,05), чем у контрольных телочек.

По количеству специфических антител к лептоспирам разных серовариантов у большинства подопытных животных отмечали значительные индивидуальные колебания: высокое содержание антител — к одному(им) и низкое или их отсутствие — к другому(им) антигену(ам). Этим было обусловлено отсутствие достоверных различий в величине обратных титров антител к соответствующим серовариантам лептоспир между животными во всех группах. При этом через 1 мес после вакцинации в сыворотке крови только у одного животного из шести в I группе обнаружили антитела ко всем введенным серовариантам лептоспир (обратные титры для разных серовариантов в этой группе — от 16,67±16,67 до 233,33±128,24). Во II группе у трех телочек из шести выявили антитела ко всем серовариантам лептоспир (обратные титры — от 233,33±128,24 до 266,67±108,53). Ни у одного животного из III и IV групп не было антител ко всем серовариантам лептоспир, имеющимся в вакцине (обратные титры — соответственно 33,33±33,33-350,00±154,38 и 83,33±40,14-333,33±149,81). Через 2 мес у большинства телочек в I, III и IV группах титры антител к одному или всем введенным серовариантам лептоспир снижались (вплоть до полного отсутствия). Так, у всех животных в III группе и у пяти из шести — в I и IV не выявили антитела к сероварианту sejroe, во II — отмечали более однородный и выраженный иммунный ответ при менее явном снижении концентрации антител (обратные титры — 91,67±63,79-233,33±128,24).

Таким образом, у телочек подкожная инъекция сукцината хитозана за 3 сут до вакцинации обусловила через 1 мес после вакцинации оптимизацию доли лимфоцитов в лейкограмме, повышение числа Т-лимфоцитов в крови, более высокую степень их дифференцировки, увеличение концентрации IgA в сыворотке крови, через 2 мес вызвала повышение численности фракции Т-лимфоцитов, обогащенной хелперами/индукторами, количества γ-глобулинов в сыворотке крови и способствовала более выраженному иммунному ответу с образованием специфических антител ко всем серовариантам лептоспир в вакцине. Введение телочкам сукцината хитозана одновременно с вакцинацией через 1 мес привело к повышению числа Т-лимфоцитов в крови и степени их дифференцировки, но через 2 мес — к снижению концентрации IgA в сыворотке крови по сравнению с этим показателем у животных, которым вводили препарат хитозана за 3 сут до вакцинации. Инъекция сукцината хитозана через 3 сут после вакцинации обусловила через 1 мес оптимизацию доли лимфоцитов в лейкограмме, увеличение содержания IgA в сыворотке крови, но вызвала снижение числа В-лимфоцитов и численности фракции Т-лимфоцитов, обогащенной хелперами/индукторами, через 2 мес — привела к снижению концентрации IgM в сыворотке крови по сравнению с показателем у телочек, которым вводили препарат одновременно с вакцинацией. При этом у животных наблюдали повышение содержания общего белка в сыворотке крови в поствакцинальный период и тенденцию к снижению степени выраженности диспротеинемии. Следовательно, введение сукцината хитозана телочкам за 3 сут до вакцинации против лептоспироза способствует активизации наиболее широкого спектра механизмов гуморального и клеточного иммунитета в поствакцинальный период.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. Иммунопрофилактика болезней животных. Пер. с нем. Н.Б. Черных /Под ред. Х.Г. Гизатулина, Н.З. Хазипова. М., 1981.
2. М а л а х о в  Ю.А. Лептоспироз животных. М., 1992.
3. К у з н е ц о в  П.А.,  А л б у л о в  А.И.,  К л ю к и н а  В.И. и др. Изучение иммуномодулирующих свойств сукцината хитозана. Ветеринария и кормление, 2007, 5: 12-13.
4. В о р о б ь е в  А.А. Принципы классификации и стратегия применения иммуномодуляторов в медицине. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 2002, 4: 93-98.
5. Ш е й б а к  В.В.,  Н у д ь г а  Л.А.,  Г р е ч у х и н  А.Н. и др. Влияние введения иммуностимулятора и вакцины на динамику клинико-иммунологических показателей у поросят-сосунов. Тез. докл. науч.-произв. конф. «Новые фармакологические средства в ветеринарии». Л., 1989: 75-76.
6. С а х а р о в  Р.С.,  В и х а  Г.В.,  Б а т и щ е в  А.И. и др. Новый иммуномодулятор для получения агглютинирующих и преципитирующих антител. Биотехнология, 1998, 2: 59-63.
7. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных. Справ. пос. Изд. перераб. и доп. /Под ред. А.П. Калашникова, Н.И. Клейменова, В.Н. Баканова. М., 2003.
8. П о н я к и н а  И.Д.,  Л е б е д е в  К.А.,  В а с е н о в и ч  М.И. и др. Способ определения иммунологического состояния организма. А. с. 1090409 (РФ) МКИ3 А 61 К 39/00, №3429. 198/28-13; заявл. 23.04.82; опубл. 07.05.84. Бюл. ¹ 17.
9. П е т р о в  Р.В.,  Х а и т о в  Р.М.,  П и н е г и н  Б.В. и др. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях (методология и методические рекомендации). М., 1989.
10. Б э м  Э. Простая радиальная иммунодиффузия по Манчини. В кн.: Иммунологические методы. М., 1987: 49-57.
11. Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях. М., 1981.
12. П л о х и н с к и й  Н.А. Биометрия. Новосибирск, 1961.
13. Ч у м а ч е н к о  В.Е.,  В ы с о ц к и й  А.М.,  С е р д ю к  Н.А. и др. Определение естественной резистентности и обмена веществ у сельскохозяйственных животных. Киев, 1990.
14. К а р п у т ь  И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных. Минск, 1986.
15. К о н д р а х и н  И.П.,  А р х и п о в  А.В.,  Л е в ч е н к о  В.И. и др. Методы ветеринарно-клинической лабораторной диагностики. Справочник /Под ред. И.П. Кондрахина.  М., 2004.
16. T i z a r d  I.R. Veterinary Immunology. An introduction. Ed. 6. Philadelphia, London, Toronto, Montreal, Sydney, Tokyo, 2000.
17. Г а р к а в и  Л.Х.,  К в а к и н а  Е.Б.,  У к о л о в а  М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов-на-Дону, 1990.

 

IMMUNOREACTIVITY IN HEIFERS AFTER VACCINATION AGAINST LEPTOSPIROSIS AGAINST A BACKGROUND OF SUBCUTANEOUS INTRODUCTION OF CHITOSAN SUCCINATE

D.V. Ivanov¹, E.V. Krapivina¹, Yu.N. Fedorov², A.I. Albulov²

On the heifers of the Black-and-White breed the immunological reactivity (on cellular and hu-moral factors) was estimated in connection with the term of chitosan succinate introduction during vaccination of animals after leptospirosis. It was established that strongly pronounced immune response may be observed after injection of preparation for 3 days before vaccination.

Key words: immune status, vaccination, leptospirosis, lymphocytes, antibodies, immu-noglobulins, chitosan succinate, heifers.

 

1ФГОУ ВПО Брянская государственная сельскохозяйственная академия, 243365 Брянская область, Выгоничский район, с. Кокино, e-mail: cit@bgsha.com; 2ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Россельхозакадемии, 141142 Московская обл., Щелковский р-н, п/о Кашинцево, пос. Биокомбинат, e-mail: vnitibp@mail.ru

Поступила в редакцию 17 декабря 2008 года

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Оформление электронного оттиска

От эксперимента — к практике Всероссийский НИИ селекции и семеноводсва овощных культур Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства Всероссийский НИИ cельскохозяйственной биотехнологии РАСХН Биотехнический научно-экспериментальный комплекс "ГосНИИсинтезбелок"